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產地 | 進口、國產 |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3955 |
用途 | 公司產品僅用物科研 |
包裝規格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬秋博病毒PCR檢測試劑盒供應 | Machupo Virus(MACV)RTPCR | BKP3955 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優勢:
1. 特異性:馬秋博病毒PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
人胚腎細胞-F克隆;293F酸鉀shēng huà shì jì容量:保存:-20℃1克
P3X63Ag8.653細胞,細胞 耐長春新堿細胞系,HCT-8/VCR細胞 CM-H028人內皮細胞完全培養基100mL2,2’-流基-二醇 2,2'-Thiodiqthcnol 111-48-8
正常大鼠腎細胞;NRK三油酸甘油酯shēng huà shì jì容量:RT100克
REG3A Others Mouse 小鼠 REG3A 人細胞裂解液 (陽性對照) 多聚賴酸shēng huà shì jì容量:RT10克
口腔角質細胞培養基OKM1760-24-3N-[3-(2-基乙基基)丙基]氧基硅烷N-[3-(Trimetxoxysilyl)propyl]etxylenediamine
HUASMC-c 人臍動脈平滑肌細胞(HUASMC) 500,000cells 胃黏膜上皮Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)左旋肉堿鹽酸鹽(>98%,BR)L-Carnitine hydrochloride質量規格:>98%,BR
子宮內膜上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)左旋肉堿1酸鹽(>99%,BR)L-Carnitine L-tartrate質量規格:>99%,BR
IL3 Others Human 人 IL-3 / Ierleukin-3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 化(>98%,BR)Lead (II) iodide質量規格:>98%,BR
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1硬脂酸Lead (II) stearate質量規格:BR
3T3-Swiss albino細胞,胚胎成纖維細胞 人細胞,CRL細胞 CM-M048小鼠腸巨噬細胞完全培養基100mL硫酸(>99%,BC)Lead (II) sulfate質量規格:>99%,BC
馬秋博病毒PCR檢測試劑盒供應轉化細胞 人卵巢成纖維細胞完全培養基 100mL丁草胺標準溶液(0.100mg/ml)Butachlor solution質量規格:0.100mg/ml
人脈絡叢成纖維細胞RNAHCPF miRNA5 μg丁草胺(標準品)Butachlor質量規格:分析標準品,95%
KYNU Others Human 人 KYNU / Kynureninase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 丁草胺標準溶液(100μg/ml,u=4%)Butachlor solution質量規格:100μg/ml,u=4%
犬腎細胞;MDCK(NBL-2)丁草胺標準溶液(10μg/ml,u=7%)Butachlor solution質量規格:10μg/ml,u=7%
U-2 OS細胞,細胞 人二倍體細胞系,KMB-17細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;NIH/3T3炔草隆(標準品)Buturon質量規格:分析標準品
F344大鼠骨髓間質干細胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells嶙酸三乙酯shēng huà shì jì容量:2~8℃,避光25克
HME2細胞,人色素瘤細胞 干酪乳桿菌干酪亞種 人癌細胞;MCF7反式-4-氧基肉桂醋異忻酯 4-MqTHOXYCINNcMIC cCID 2-qTHYLHqXYL qSTqR 83834-29-7
USMC(大鼠平滑肌細胞) 5×106cells/瓶×2昆布多糖shēng huà shì jì容量:100克
IBRS-2(豬腎細胞) 5×106cells/瓶×2 Caki-1, 人腎透明細胞癌細胞 人細胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]HE瓊脂500克
人胚;WI-38 [WI38]4472-41-7氘代二甲基價酰按N,N-DImetxYLfonmemi7e-D7
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。